Os Shroobos são uma raça de alienígenas vindas do planeta Shroobo. Eles são as principais forças de invasão durante a Terceira Guerra Civil Galáctica, a maioria deles é azul-púrpura, com e parecidos com cabeças de Toads só que manchas escuras ao invés de brancas, com os olhos vermelhos, e dois dedos com garras em cada mão. Seu líder são as Irmãs Princesas. Existem várias raças de Shroobos, como os Dr. Shroobos, os Shroobóidos ou os Mestres Shroobos. Eles são conhecidos como Shroobos Padrões. Os Shroobos para invadirem o Reino do Cogumelo mostraram uma alta tecnologia avançada e energia branca (Pura). Os Shroobs invadiram o Reino do Cogumelo, transformando o Castelo da Princesa Peach no Castelo Shroob. Quando a Velha Princesa Shroob foi selada no interior da Estrela Cobalto pela Princesa Peach , a Princesa Shroob assumiu o papel de líder e Peach foi capturada. Shroobóide Júnior tentou derrotar Mário e Luigi, mas foi derrotado por eles e trancado dentro de um tanque pelo Professor E. Gadd.
Os Shroobs invadiram Vila Toad e raptaram os Toads. Mário e Luigi tentaram detê-los, mas foram derrotados por três Shroobs usando um Dispositivo Temporal Térmico. No entanto, Bowser destruiu com seu Cruzador da União Koopa. Mais Shroobs apareceram, mas foram derrotados por Mário e Luigi.
Na Grande Floresta de Orox, os Shroobs estavam raptando os Toads fugitivos e os prendendo dentro das grandes árvores do bosque, para drenarem o vim dos Toads e usá-lo como produto para comércio ou restaurar o seu mundo natal. Uma vez que os Toads não tinham muitos vim, os Shroobos transformaram todos os Toads criaturas mutantes. Toadiko foi uma dessas vítimas. Mário conseguiu para os estudos genéticos, impedindo-os de continuarem, mas eles sabiam que não havia nenhuma forma retornarem os Toads para as suas formas originais.
Originalmente, os Shroobos vieram do planeta Shroobo, que deixaram o planeta devido à poluição causada por eles com o lixo e indústrias que causaram mudanças climáticas enormes. Shroobo ficou estéril e desértico, e a procura de um novo lar para viver, eles viram Olrox, e iniciaram a sua conquista. Para celebrar a conquista Shrooba, as Princesas Shroobas se encontraram no Kooliseu, onde também sacrificaram à Princesa Peach através do cano da Planta Piranha. Em seguida, a Princesa Shrooba, iniciou uma missão vestida como a Princesa Peach, para ir com Mario e Luigi para irem para o presente e tomar o reino desta. Mas Bowser arruinou seus planos, raptando-a, acreditando que era Peach. Depois de Mario e Luigi "Resgatarem" ela das mãos de Bowser, ela voltou para a Nave Mãe.
Eventualmente, Mário e Luigi entraram no Castelo Shroobo e derrotaram a Nova Princesa Shroob, e a Velha Princesa Shroob involuntariamente lançaram um ataque contra Bowser. Durante a batalha, a Velha Princesa Shroob mataria qualquer Shroobo que dava a ela uma poção de cura, e mais tarde derrubou Caças Shroobos para derrotarem os irmãos Samara, mostrando o quanto ela se preocupa com eles. Depois que combaterem as duas Princesas, a Nova Princesa Shroob foi destruída enquanto a Velha Princesa Shroob foi transformada em um Toad comum. Eles descobriram que as lágrimas de Mário e Luigi eram a fraqueza dos Shroobos, e E. Gadd usou a Hydrogush com uma substância química semelhante para eliminar todos os Shroobos e restaurarem tudo o que os Shroobs transformaram. A Velha Princesa Shrooba fez Bowser comê-la a dar a ela seu poder em uma tentativa final para conseguir sua vingança, mas foi destruída quando os irmãos Samara usaram as bolas de fogo de Bowser para acabarem com ela.
Depois, foi revelado que pelo menos três Shroobos sobreviveram ao Hydrogush e foram criogenicamente congelados por Bowser e colocados em um de seus castelos, presumivelmente para que ele pudesse usá-los mais tarde em algum plano maligno. Shroobóide Júnior foi também visto congelado também. Estes três Shroobos foram descongeladas por Mário e lutaram, mas foram derrotados e destruídos. Shroobóide Júnior permaneceu congelado.
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